اصول
Cellulose acetate فلم electrophoresis هڪ اليڪٽرروفورسس طريقو آهي جيڪو هڪ سپورٽ جي طور تي سيلولوز ايڪٽيٽ فلم استعمال ڪندي آهي. اهو رجحان جنهن ۾ چارج ٿيل ذرات برقي فيلڊ جي عمل هيٺ مخالف اليڪٽرروڊ ڏانهن منتقل ڪن ٿا، اليڪٽرروفورسس سڏيو ويندو آهي. جيئن ته هر پروٽين جو هڪ مخصوص isoelectric point آهي، جيڪڏهن هڪ پروٽين کي محلول ۾ رکيو وڃي ٿو جنهن جي pH ان جي isoelectric point کان گهٽ آهي، ته پروٽين کي مثبت طور تي چارج ڪيو ويندو ۽ منفي اليڪٽرروڊ ڏانهن منتقل ٿيندو. ان جي برعڪس، اهو مثبت قطب ڏانهن هلندو آهي. ڇاڪاڻ ته هڪ برقي ميدان ۾ حرڪت ڪندڙ پروٽينن جي ماليڪيولن جي رفتار جو تعلق انهن جي چارج سان آهي، ماليڪيولن جي شڪل ۽ سائيز، مختلف پروٽينن کي اليڪٽرروفورسس ذريعي الڳ ڪري سگهجي ٿو. سيرم ۾ مختلف قسم جي پروٽين شامل آهن، جن مان سڀئي پي ايڇ 7.5 يا گهٽ تي isoelectric پوائنٽون آهن. جڏهن سيرم کي پي ايڇ 8.6 بفر ۾ الیکٹروفورسس کي هلائڻ لاءِ رکيو وڃي ٿو، سڀ سيرم پروٽين کي منفي طور تي چارج ڪيو ويندو آهي ۽ برقي ميدان ۾ مثبت طرف منتقل ٿيندو. جيئن ته مختلف سيرم پروٽينن تي هڪ ئي pH تي مختلف چارج هوندا آهن، ان ڪري ماليڪيولر ذرڙا سائيز ۾ مختلف هوندا آهن، ۽ اهڙيءَ طرح لڏپلاڻ جي رفتار به مختلف هوندي آهي، ۽ اهي اليڪٽرروفورسس ذريعي الڳ ٿيندا آهن. سيرم پروٽينن جا isoelectric پوائنٽس ۽ ماليڪيولر وزن هيٺ ڏنل جدول ۾ ڏيکاريا ويا آهن:
| پروٽين | Isoelectric Points (PI) | ماليڪيولر وزن |
| البمين | 4.88 | 69000 |
| α1-گلولين | 5.00 | 200 000 |
| α2-گلولين | 5.06 | 300 000 |
| β-گلولين | 5.12 | 9 000 ~ 150 000 |
| γ-گلولين | 6.85 ~ 7.50 | 156 000 ~ 300 000 |
تجربو مختلف پروٽينن کي رت جي سيرم ۾ سيلولوز ايڪٽيٽ جھلي (abbr. CAM) جي مدد سان ميڊيا جي طور تي الڳ ڪرڻ آهي. CAM هڪ قسم جي فوم ٿيل لوز آهيeسٺي يونيفارم سان فلم، ۽ ٿولهه 0.1mm-1.5mm آهي، جنهن ۾ هڪ خاص پاڻي جذب آهي.
CAM Electrophoresis لاءِ مواد، اوزار ۽ ريجنٽ
نمونا:صحتمند انساني رت جي سيرم
اوزار:پاور سپلائي DYY-6C، electrophoresis ٽينڪ DYCP-38C، اعليٰ نموني لوڊشيڊنگ WD-9404
ريجنٽس
1) cellulose acetate جھلي 7X9cm
2) پي ايڇ 8.6 باربيٽول بفر حل (آئنڪ طاقت 0.05-0.09، اهو 0.06 ٽائيم آهي.): وٺو 1,84g Diethyl barbituric acid، ۽ پوءِ 1.03g Diethyl سوڊيم pentobarbital وٺو، گرم ڪرڻ لاءِ ڪجهه ڊسٽل پاڻي شامل ڪريو، ۽ تيار ڪريو. 1000ml تائين؛
3) داغ: Ponceau S 0.2g، Trichloroacetic 3g، 100ml distilled water شامل ڪريو؛
4) TBS/T يا PBS/T: 45ml 95% ethanol، 5ml glacial acetic acid، 50ml distilled water شامل ڪريو؛
5) صفائي جو حل: 70ml anhydrous ethanol، 30ml glacial acetic acid.
تجربا Method
1) جھلي تيار ڪريو: جھلي کي باربيٽول بفر جي حل 30 منٽ-8 ايڇ ۾ وجھو، ۽ ان کي ٻاھر ڪڍو، جاذب پيپر ذريعي اضافي حل ڪڍيو.
2) لوڊ ڪرڻ جا نمونا: جھلي جي ٻرندڙ پاسي ۽ هموار پاسي ۾ فرق ڪريو، ۽ 1.5 سينٽي جي مفاصلي تي ھڪڙي لڪير کي نشان ھڻڻ جي مٿئين پاسي تائين. بهتر نموني لوڊ ڪرڻ واري اوزار ذريعي نموني لوڊ ڪريو ڪنهن پاسي کان. نوٽ: نموني کي جھلي جي ڪنهن پاسي تي لوڊ ڪيو وڃي. سيرم جا نمونا مڪمل طور تي جھلي ۾ داخل ٿيڻ کان پوء، جھلي کي ڦيرايو، ٿلهي پاسي (نمونء سان) کي ٽينڪ ڏانھن ھيٺ ڪريو، ۽ نموني سان گڏ آخر ۾ منفي اليڪٽرروڊ ۾ رکيل آھي.
3) Electrophoresis: بجلي جي فراهمي کي بند ڪريو، 0.4～0.6m A/cm جھلي، هلندڙ وقت 30-45 منٽ آهي. electrophoresis کي هلائڻ کان پوء، بجلي بند ڪريو.
4) داغ ۽ صاف ڪريو: ٽانڪي مان جھلي ڪڍو، ۽ وسريوit 5 منٽن لاءِ رنگ جي حل ۾، ۽ پوءِ ان کي صاف ڪرڻ واري محلول ۾ 3-4 ڀيرا وڌيڪ صاف ڪريو جيستائين پس منظر جو رنگ صاف نه ٿئي. سيرم پروٽين کي بينڊن تي ڏيکاريو وڃي، ۽ عام طور تي پنج زونون آهن، نشان لڳل لڪير جي مٿين پڇاڙي، البومين، α1-gloulin، α2-gloulin، β-gloulin، γ-gloulin.
5) بچاء: سڪل اليڪٽرروفورسس وجھوبينڊ10-15 منٽن لاءِ صفائي واري محلول ۾، ۽ پوءِ ان کي ڪڍي صاف شيشي تي رکي، سڪي وڃڻ کان پوءِ، اها شفاف فلم بڻجي ويندي.بينڊ.
تجربونتيجو
سيرم نموني جي علحدگيء جو اثر سٺو آهي، ۽ ڪو به بينڊ ٽيلنگ رجحان ناهي. نتيجن جي ورجائي قابليت مختلف ٿي سگهي ٿي ٽيسٽ جي طريقيڪار ۽ تجربن جي طريقن جي ڪري، ۽ ورجائي قابليت اعلي آهي.
نتيجو
تيز ڪلينڪ اليڪٽرروفورسس ڳولڻ وارو نظام (Electrophoresis ٽانڪيDYCP-38C،بجلي جي فراهميDYY-6C ۽ اعليٰ نموني لوڊشيڊنگ WD-9404) اسان جي طرفان تيار ڪيلڪمپني Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdتجرباتي گهرجن کي پورو ڪري ٿو،۽نتيجا reproducible، سادو ۽ تيز، لاء مناسب آهنسيکارڻتحقيق.
بيجنگ ليوئيبايو ٽيڪنالاجي ڪمپني، لميٽيڊ حياتياتي سائنس جي صنعت لاءِ اليڪٽروفورسس پراڊڪٽس ٺاهڻ ۾ ماهر آهي، جيڪاچين ۾ 50 سالن کان وڌيڪ تاريخ آهي ۽ ڪمپني کي دنيا جي چوڌاري مستحڪم ۽ اعلي معيار جي شين مهيا ڪري سگهو ٿا. ترقي جي سالن جي ذريعي، اهو توهان جي پسند جي لائق آهي!
اسان ھاڻي ڀائيوارن کي ڳولي رھيا آھيون، ٻئي OEM اليڪٽرروفورس ٽينڪ ۽ تقسيم ڪندڙ ڀليڪار آھن.
اسان جي باري ۾ وڌيڪ معلومات لاء، مهرباني ڪري اسان سان رابطو ڪريو اي ميل ذريعي[اي ميل محفوظ]يا[اي ميل محفوظ].
پوسٽ ٽائيم: نومبر-14-2022