هيموگلوبن اليڪٽرروفورسس تجربو

آزمائشي اصول

هيموگلوبن الیکٹروفورسس جو مقصد مختلف عام ۽ غير معمولي هيموگلوبن کي ڳولڻ ۽ تصديق ڪرڻ آهي.

هيموگلوبن جي مختلف قسمن جي مختلف چارجن ۽ آئسو اليڪٽرڪ پوائنٽس جي ڪري، هڪ مخصوص pH بفر حل ۾، جڏهن هيموگلوبن جو isoelectric پوائنٽ بفر محلول جي pH کان گهٽ هوندو آهي، هيموگلوبن هڪ منفي چارج کڻندو آهي ۽ اليڪٽرروفورسس دوران انوڊ ڏانهن لڏپلاڻ ڪندو آهي. ان جي ابتڙ، هيموگلوبن هڪ مثبت چارج سان ڪيٿوڊ ڏانهن وڌي ٿو.

هڪ خاص وولٽيج جي تحت ۽ هڪ مخصوص اليڪٽرروفورسس وقت کان پوءِ، هيموگلوبن مختلف چارجز ۽ ماليڪيولر وزنن سان مختلف لڏپلاڻ جي هدايتن ۽ رفتار کي ظاهر ڪن ٿا. هي مختلف زونن جي علحدگيءَ جي اجازت ڏئي ٿو، ۽ مختلف هيموگلوبنز جي مقدار کي طئي ڪرڻ لاءِ انهن علائقن تي بعد ۾ رنگي ميٽرڪ يا اليڪٽرروفورٽڪ اسڪيننگ تجزيا ڪري سگهجن ٿا. سڀ کان عام طور تي استعمال ٿيل طريقو آهي pH 8.6 cellulose acetate membrane electrophoresis.

cytoplasm جي اندر، ethylene glycol گروپس (CHOH-CHOH) موجود آھن گلائڪوجن يا پوليسڪچرائڊ مادو (جيئن ته ميوڪوپوليسڪرائڊس، ميوڪوپروٽينز، گلائڪوپروٽينز، گلائڪولپيڊس، وغيره) کي آڪسائيڊائز ڪيو وڃي ٿو درميان تيزاب سان ۽ الڊي ھائڊ گروپس (CHOH-CHOH) ۾ تبديل ٿي وڃن ٿا. اهي الڊي هائيڊ گروپ بي رنگ جامني-لال شيف ريجنٽ سان ملن ٿا، هڪ جامني-لال رنگ ٺاهي ٿو، جيڪو جمع ڪري ٿو جتي پولي سيڪرائڊس سيل ۾ موجود آهن. اهو ردعمل دور دراز اسيد-Schiff (PAS) داغ جي طور تي سڃاتو وڃي ٿو، اڳ ۾ گليڪوجن داغ جي طور تي حوالو ڏنو ويو آهي.

آزمائشي طريقو

مواد:سيلولوز ايڪٽيٽيادbrane، electrophoresis جو سامان(DYCP-38C ۽ بجلي جي فراهمي DYY-6C), اعليٰ نمونو لوڊ ڪرڻ وارو اوزار(پائپيٽ), spectrophotometer , colorimetric cuvettes, بفر

بفر:

(1) pH 8.6 TEB بفر: وزن 10.29 g Tris، 0.6 g EDTA، 3.2 g بورڪ ايسڊ، ۽ 1000 ml ۾ ڊسٽل پاڻي شامل ڪريو.

(2) بورٽ بفر: وزن 6.87 گرام بورڪس ۽ 5.56 گرام بورڪ ايسڊ، ۽ 1000 مليل ڊسٽل پاڻي ۾ شامل ڪريو.

عمل:

Pهيموگلوبن حل جي بحالي

رت جا 3 ملي ليٽر وٺو جنهن ۾ هيپرين يا سوڊيم سائٽريٽ هڪ anticoagulant جي طور تي هجي. 10 منٽن لاءِ 2000 rpm تي سينٽرفيوج ڪريو ۽ پلازما کي رد ڪريو. ڳاڙهي رت جي سيلن کي ٽي دفعا جسماني لوڻ سان ڌوئي (750 rpm، 5 منٽ سينٽرفيوگريشن هر ڀيري). 10 منٽن لاءِ 2200 rpm تي سينٽرفيوج ڪريو ۽ سپرنٽنٽ کي رد ڪريو. ڊسٽل ٿيل پاڻي جي برابر مقدار شامل ڪريو، پوء ڪاربان ٽيٽرا ڪلورائڊ جي مقدار 0.5 ڀيرا شامل ڪريو. 5 منٽن لاءِ زور سان شيڪ ڪريو، ۽ پوءِ 10 منٽن لاءِ 2200 rpm تي سينٽرفيوج ڪريو ته جيئن بعد ۾ استعمال لاءِ اپر Hb محلول گڏ ڪيو وڃي.

جھلي کي ترڻ

سيلولوز ايڪٽيٽ جھلي کي 3 سينٽي ميٽر × 8 سينٽي ميٽرن ۾ ڪٽيو. انهن کي pH 8.6 TEB بفر ۾ لڪايو جيستائين مڪمل طور تي سير نه ٿي وڃي، پوءِ فلٽر پيپر سان هٽائي سڪي ڇڏيو.

داغ ڏيڻ

هيموگلوبن جي حل جي 10 μl کي عمودي طور تي سيلولوز ايڪٽيٽ جھلي (اڇڙي پاسي) تي، ڪنڊ کان اٽڪل 1.5 سينٽي جي فاصلي تي رکڻ لاءِ پائيپٽ استعمال ڪريو.

Electrophoresis

بورٽ بفر حل کي اليڪٽرروفورسس چيمبر ۾ اڇو. cellulose acetate membrane کي چيمبر جي ڪيٿوڊ جي آخر ۾ داغدار پاسي سان رکو. 30 منٽن لاء 200 V تي هلايو.

ايليوشن

HbA ۽ HbA2 زونن کي ڪٽيو، انهن کي الڳ ٽيسٽ ٽيوب ۾ رکو، ۽ ترتيب سان 15 ml ۽ 3 ml distilled water شامل ڪريو. هيموگلوبن کي مڪمل طور تي ختم ڪرڻ لاء آسانيء سان ڇڪيو، پوء ملايو.

رنگ جي ماپ

ايليوشن حل لاءِ ڊسٽل واٽر استعمال ڪندي جذب کي صفر ڪريو ۽ 415 nm تي جذب کي ماپو.

حساب ڪتاب

HbA2 (%) = HbA2 ٽيوب جو جذب / (HbA ٽيوب جو جذب × 5 + HbA2 ٽيوب جو جذب) × 100٪

تجرباتي نتيجن جو حساب

پي ايڇ 8.6 TEB بفر سيلولوز ايڪٽيٽ اليڪٽرروفورسس لاءِ ريفرنس رينج: HbA > 95%, HbA2 1%-3.1%

نوٽس

Electrophoresis وقت تمام ڊگهو نه هجڻ گهرجي. اليڪٽرروفورسس دوران سيلولوز ايڪٽيٽ جھلي کي سڪي نه وڃڻ گهرجي. Electrophoresis کي روڪيو جڏهن HbA ۽ HbA2 واضح طور تي الڳ ٿي ويا آهن. ڊگھي اليڪٽرروفورسس بينڊ ڊفيوشن ۽ بلرنگ سبب ڪري سگھي ٿي.

تمام گهڻو نموني استعمال ڪرڻ کان پاسو ڪريو. هيموگلوبن جو اضافي مائع بينڊ ڊيٽيچمينٽ يا ناکافي داغ جو سبب بڻجي سگهي ٿو، جنهن جي نتيجي ۾ غلط طور تي HbA جي سطح وڌي وڃي ٿي.

پروٽين سان سيلولوز ايڪٽيٽ جھلي جي آلودگي کي روڪيو.

موجوده تمام گهڻو نه هجڻ گهرجي؛ ٻي صورت ۾، هيموگلوبن بينڊ الڳ نه ٿي سگھي.

هميشه عام ماڻهن جا نمونا ۽ ضروري سڃاتل غير معمولي هيموگلوبن کي ڪنٽرول طور شامل ڪريو.

بيجنگ ليوئي بايو ٽيڪنالاجي هيموگلوبن الیکٹروفورسس لاءِ پروفيشنل اليڪٽرروفورس ٽينڪ ٺاهي ٿي جيڪا ماڊل آهيDYCP-38Ccellulose acetate membrane electrophoresis tank, and there are two models electrophoresis power supply for cellulose acetate membrane electrophoresis ٽينڪDYY-2C۽DYY-6Cبجلي جي فراهمي.

ان کان علاوه، بيجنگ Liuyi بايو ٽيڪنالاجي گراهڪن لاء cellulose acetate جھلي مهيا ڪري، ۽ cellulose acetate جھلي جي سائيز ترتيب ڏئي سگهجي ٿو. ڀلي ڪري آيا اسان کي نموني ۽ وڌيڪ معلومات لاء پڇا ڳاڇا ڪرڻ لاء.

بيجنگ Liuyi برانچ چين ۾ 50 سالن کان وڌيڪ تاريخ آهي ۽ ڪمپني کي دنيا جي چوڌاري مستحڪم ۽ اعلي معيار جون شيون مهيا ڪري سگھن ٿيون. ترقي جي سالن جي ذريعي، اهو توهان جي پسند جي لائق آهي!

اسان ھاڻي ڀائيوارن کي ڳولي رھيا آھيون، ٻئي OEM اليڪٽرروفورس ٽينڪ ۽ تقسيم ڪندڙ ڀليڪار آھن.

جيڪڏهن توهان وٽ اسان جي شين جي خريداري جو منصوبو آهي، مهرباني ڪري اسان سان رابطو ڪرڻ ۾ سنکوڪ نه ڪريو. توهان اسان کي اي ميل تي پيغام موڪلي سگهو ٿا[اي ميل محفوظ]يا[اي ميل محفوظ]، يا مھرباني ڪري اسان کي +86 15810650221 تي ڪال ڪريو يا Whatsapp +86 15810650221 شامل ڪريو، يا Wechat: 15810650221